免疫组织化学

2024-02-18

    免疫组织化学 :

因抗原和抗体结合是高度特异的,所以免疫组织化学方法具有高度的特异性、灵敏性和精确性。

由于抗原抗体反应一般不可见,所以需将某种标记物(如酶、荧光素、铁蛋白及同位素等)结合到抗体上,再用组织化学的方法显示此标记物并观察。标记的抗体可用来鉴别是否发生了特异的抗原抗体反应,并可对与抗体结合的抗原进行定位。

免疫组织化学技术分为直接法和间接法。直接法是将标记物直接标记在特异性的第一抗体上,被标记的一抗直接与抗原结合,一次孵育成功。此方法简单、需时短、特异性强,但灵敏度低、需要的抗体量大,现在已被间接法代替。间接法增加了第二抗体。二抗是抗产生特异性一抗的动物(如兔、羊、小鼠等)的IgG的抗体。通过对二抗进行标记,使一抗与二抗相结合来间接显示抗原所在部位。间接法比直接法灵敏,经过二次甚至多次反应,标记强度得到放大,并且只需标记一种抗IgG的抗体即可鉴定多种抗原。一些间接法需要三级抗体,比如酶抗酶法(常用酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、亲和素-生物素复合物法,这些方法中二抗桥接一抗和三抗,三抗是由酶与相对应的抗体组成的复合物,可作为特异性显色基团。这些方法的灵敏度更高。

免疫组织化学方法的基本过程包括:组织的固定、制片和反应。由于该法有时会用于定量实验,因此要注意设置阳性、阴性和自身对照。操作过程中,还要注意消除非特异性染色、避免交叉反应。此方法主要用于研究心理和行为的神经化学机制。